植物丙二醛的测定

日期： 2021-09-01

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一、试剂

注意：所有试剂除注明者外，均为分析纯。

1.1 磷酸缓冲液：

A液：0.2M的KH₂PO₄溶液分析纯KH2PO₄27.216克，用蒸馏水定容至1000毫升。

B液：0.2M的KH₂PO₄溶液分析纯K₂HPO₄·3H₂O 45.644克，用蒸馏水定容至1000毫升。

或

A液：0.2M的NaH₂PO₄溶液分析纯NaH₂PO₄·2H₂O 31.21克，用蒸馏水定容至1000毫升。

B液：0.2M的Na₂HPO₄溶液分析纯Na₂HPO₄•12H₂O 71.64克，用蒸馏水定容至1000毫升。

1.2 母液的配制：

0.5M 磷酸缓冲液（PH=7.8）：A液21.25ml+B液228.25ml定容至1000ml；

1.3 MDA反应液的配置：

0.6克TBA（硫代巴比妥酸），先用少量1MNaOH溶解，用10%TCA（三氯乙酸）定容至100ml。

二、主要仪器

万分之一分析天平、紫外分光光度计、医用离心机、研钵

三、试样的制备

取新鲜样本剪碎充分混匀后，装入样本瓶备放入4℃冷藏用。

四、分析步骤

4.1酶液的制备：

称取鲜样0.5g放入研钵中，加5毫升PH=7.8的磷酸缓冲液，冰浴研磨，匀浆倒入离心管中，冷冻离心20分钟（10000×g），上清液（酶液）倒入试管中，置于0～4℃下保存待用。

4.2 MDA的测定：

1ml酶液+2ml0.6%的TBA，封口沸水浴15分钟，迅速冷却后再离心，取上清液，在600、532、450nm 三个波长下比色。

五、结果计算：

植物丙二醛的测定

式中：

A₆₀₀、A₅₃₂、A₄₅₀—为试样在600、532、450nm下测得的吸光度

W—为称取试样鲜重质量，g；

V—为提取液体积，ml。

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