土壤蔗糖酶是作用物β-D-呋喃果糖苷中未还原的β-D-呋喃果糖苷末端残基的水解酶，能酶促土中蔗糖水解成葡萄糖和果糖。今天，我们就来聊聊如何通过靛酚蓝比色法检测土壤蔗糖酶。
一.试剂
（1）3，5-二硝基水杨酸溶液：称0.5g二硝基水杨酸，溶于20ml 2N氢氧化钠和50ml水中，再加18.2g酒石酸钾钠，用水稀释至100ml（不超过7天）。
（2）pH5.5磷酸缓冲液：1/15M磷酸氢二钠（11.867g Na2PO4•2H2O溶于1L蒸馏水中）0.5ml加1/15M 磷酸二氢钾（9.078g KH2PO4溶于1L蒸馏水中）9.5ml即成。
（3）8％蔗糖溶液。
（4）甲苯。
（5）标准葡萄糖溶液：将葡萄糖先在50-58℃条件下，真空干燥至恒重。然后取500mg溶于100ml 12mmol苯甲酸溶液中（5mg还原糖/ml），即成标准葡萄糖溶液。
二．主要仪器
万分之一分析天平，恒温箱，水浴锅，分光光度计
三．试样的制备
取新鲜的实验室待测样品充分混匀后，按四分法缩减至 100g，粉碎，然后全部通过 10目孔径筛，装入样品袋备用。
四．分析步骤
4.1 试样溶液提取
称取试样2g，精准至0.001g，置于50ml三角瓶中，注入15ml 8％蔗糖溶液，5ml pH5.5磷酸缓冲液和0.25ml甲苯。摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。到时取出，迅速过滤，滤液供蔗糖酶的测定。
4.2 空白溶液制备
除不加待测样品外，应用的试剂和步骤操作同4.1
4.3 对照试样溶液制备
除用蒸馏水代替蔗糖溶液外，应用的试剂和步骤操作同4.1
4.4 标准曲线绘制
取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml含5mg还原糖/ml的标准葡萄糖溶液到50ml容量瓶中，加3ml 3，5-二硝基水杨酸，并在沸水的水浴锅中加热5min，随即将容量瓶移至自来水流下冷却3min。溶液因生成3-氨基-5-硝基水杨酸而呈橙黄色，最后用蒸馏水稀释至50ml，并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。
4.5 试样测定
从样品滤液中吸取1ml，若浓度过低，可多取滤液。注入50ml容量量瓶中，加3ml 3，5-二硝基水杨酸，同测定标准曲线同样的方法进行显色比色。
五．结果计算
蔗糖酶活性以24h后1g土壤葡萄糖的毫克数表示。
葡萄糖（毫克）＝a×50×ts/m
a－显色液中葡萄糖浓度（mg/ml），
50－显色液体积（ml）；
ts－分取倍数（吸1ml滤液比色就是20/1）；
m－烘干土质量（g）。