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一、微生物碳利用效率的概念及其环境意义微生物碳利用效率(CUE):微生物分配给生长的碳量占吸收总碳量的比率,体现了微生物合成代谢和分解代谢之间的平衡。二、微生物碳利用效率测定的原理设置18O标记处理以及加入等量自然丰度水的对照组,通过培养过后DNA中18O丰度的差值来判读加入土壤的标记水有多少进入了新产生的DNA中,由此估算微生物生长速率。测定方法——18O-H2O培养法:试样的准备:收集200g左右田间土壤样品,混匀,将其中的大约100g土壤鲜样通过2mm 孔径筛,去除石头和肉眼可见的根等杂质,装入聚乙烯样品袋备用。预培养:*土壤野外采回后迅速过2mm筛,去除土壤内石块、根系、凋落物等;*烘干法测量土壤含水量土壤;*尽快将过筛后土壤熏蒸浸提法测量微生物MBC;(1) 田间持水率的测定调整土壤含水量到60%田间持水量(WHC,water holding capacity);将土壤放入实验所需温度培养箱进行预培养,预培养时间遵照实验设计(2)预培养土样控水处理18O标记培养一个样本一个对照组,或根据样本情况挑选20%样品做对照土壤DNA的提取野外采集土壤带回实验室迅速分装冻干提取DNA,并测得DNA含量。18O丰度测定吸取DNA提取液于洁净的银囊(已称重)中并置于60℃烘箱中干燥整夜后(称重)包好,用质谱仪测定18O丰度和总氧含量。MBC测定氯仿熏蒸提取法...计算更多检测相关讯息s...
发布时间: 2024 - 09 - 10
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发布时间: 2022 - 03 - 17
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今天,我们通过5个食品样本的分析案例给大家分享一下如何通过高效液相色谱法对17种水解氨基酸进行测定:一、实验方法及原理试样经酸水解得各种氨基酸后,经高效液相色谱在线衍生检测分析外标法定量测定氨基酸酸的含量。二、实验步骤2.1主要实验仪器     HPLC(紫外检测器,在线衍生)离心机(12000rpm)天平(0.01g,0.1mg)超声波清洗机(240w)干式氮吹仪(100℃)烘箱(105℃,115℃)2.2 实验步骤1、 水解:准确称取一定量试样(精确至0.0001g),使试样中蛋白质含量在10mg~20mg范围内。将称量好的样品置于水解管中。根据试样的蛋白质含量,在水解管内加10mL~15mL6M盐酸溶液。用氮气置换管内空气后密封。2、 水解管在115±5℃烘箱中水解22~24h后放至室温,取出水解液,用0.22μm孔径的滤膜过滤,取1ml续滤液至进样小瓶中,100℃氮吹干后用0.1M的HCL水溶液超声溶解固体物质,取溶液直接进样。(根据实际浓度可以用0.1M的HCL水溶液适当稀释,一般植物均可用1mL 0.1M HCL水溶液稀释)3、 标准溶液配制:购买市售标准溶液(10pmol/μL、25pmol/μL、100pmol/μL、250pmol/μL、1000pmol/μL)。2.3 色谱条件参数值色谱柱AdvanceBio AAA C18,4.6 × 100 mm, 2.7 µm流速1.5 mL/min柱温40 °C流动相A) 10 mmol/L 磷酸氢二钠和 10 mM硼酸钠溶液,用盐酸将 pH 调节为 8.2B) 甲醇:乙腈:水,45:45:10 (v:v:v)梯度程序时间 (min) %B0.0 20.35 215.7 10015.8 218.0 2检测器338 nm,带宽 10 nm;参比 390 nm,带宽 20 nm(一级氨基酸)262 nm,带宽 16 nm;参比 324 nm,带宽 8 nm(二级氨基酸)进样程序• 吸取 2.5 μL 硼酸盐缓冲液(1号瓶)• 吸取 1.0 μL 样品• 在清洗口将3.5 μL 混合液混合 5 次• 等待 0.2 分钟,然后吸取 0.5 μL OPA(2号瓶)• 在清洗口将 4 μL 混合液混合 10 次• 吸取 0.4 μL FMOC(3号瓶)• 在清洗口将 4.4 μL 混合液混合 10 次• 吸取 32 μL 稀释剂(4号瓶,此步骤一般情况不使用)• 在清洗口将 20 μL 混合液混合 8 次• 进样• 等待 0.1 分钟• 阀切换至旁路2.4 测定方法依据保留...
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发布时间: 2022 - 03 - 04
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铵态氮是自然界氮元素的一种存在形态,以铵根离子(NH4+)的形态存在和流通于土壤、植物、肥料和大气中。可以与其他形式的氮元素在一定条件下相互转化。今天栢晖给大家介绍一下如何通过2mol•L-1KCl浸提—靛酚蓝比色法测定土壤中的铵态氮。方法原理2mol•L-1KCl溶液浸提土壤,把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。土壤浸提液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用,生成水溶性染料靛酚蓝,溶液的颜色很稳定。在含氮0.05~0.5mol•L-1的范围内,吸光度与铵态氮含量成正比,可用比色法测定。试剂(1)2mol•L-1KCl溶液 称取149.1g氯化钾(KCl,化学纯)溶于水中,稀释至1L。(2)苯酚溶液 称取苯酚(C6H5OH,化学纯)10g和硝基铁氰化钠[Na2Fe(CN)5NO2H2O]100mg稀释至1L。此试剂不稳定,须贮于棕色瓶中,在4℃冰箱中保存。(3)次氯酸钠碱性溶液 称取氢氧化钠(化学纯)10g、磷酸氢二钠(Na2HPO4•7H2O, 化学纯)7.06g、磷酸钠(Na3PO4•12H2O, 化学纯)31.8g和 52.5g•L-1次氯酸钠(NaOCl,化学纯,即含5%有效氯的漂白粉溶液)10mL溶于水中,稀释至1L,贮于棕色瓶中,在4℃冰箱中保存。(4)掩蔽剂 将400g•L-1的酒石酸钾钠(KNaC4H4O6•4H2O, 化学纯)与100g•L-1的EDTA二钠盐溶液等体积混合。每100mL混合液中加入10 mol•L-1氢氧化钠0.5mL。(5)铵态氮(NH4+—N)标准溶液 称取干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4,分析纯]0.4717g溶于水中,洗入容量瓶后定容至1L,制备成含铵态氮(N)100ug •mL –1的贮存溶液;使用前将其加水稀释20倍,即配制成含铵态氮(N)5ug •mL –1的标准溶液备用。分析步骤(1)浸提 称取适量土样,准确到0.01g,置于150mL三角瓶中,按固液比1:5加入氯化钾溶液,塞紧塞子,在振荡机上振荡1h。取出静置,待土壤—氯化钾悬浊液澄清后,吸取一定量上层清液进行分析。如果不能在24h内进行,用滤纸过滤悬浊液,将滤液储存在冰箱中备用。(2)比色 吸取土壤浸出液2mL~10mL(含NH4+—N 2-25ug)放入50mL容量瓶中,用氯化钾溶液补充至10mL,然后加入苯酚溶液5mL和次氯酸钠碱性溶液5mL,摇匀。在20℃左右的室温下放置1h后(注1),加掩蔽剂1mL以溶解可能产生的沉淀物,然后用水定容至刻度。2h后,用1cm比色槽在625nm波长处(或红色滤光片)进行比色,读取吸光度。(3...
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发布时间: 2022 - 02 - 11
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超氧化物歧化酶(SOD)是生物体系中抗氧化酶系的重要组成成员,广泛分布在微生物、植物和动物体内。其是在上个世纪末才被发现,可以说是生物医学研究史上的一项重大成果,于人类生命研究具有极其重要的意义。今天我们就给大家分享一下如何通过比色法测定植物酶活SOD。图片来源于网络一、试剂所有试剂除注明者外,均为分析纯。1.1 磷酸缓冲液:A液:0.2M的KH2PO4溶液 分析纯KH2PO4  27.216克,用蒸馏水定容至1000毫升。 B液:0.2M的K2HPO4溶液 分析纯K2HPO4•3H2O 45.644克,用蒸馏水定容至1000毫升。或 A液:0.2M的NaH2PO4溶液 分析纯NaH2PO4•2H2O  31.21克,用蒸馏水定容至1000毫升。 B液:0.2M的Na2HPO4溶液  分析纯Na2HPO4•12H2O 71.64克,用蒸馏水定容至1000毫升。1.2 母液的配制: (1)0.5M 磷酸缓冲液(PH=7.8):A液21.25ml+B液228.25ml定容至1000ml; (2)130mM Met(甲硫氨酸):取1.9399克Met 用磷酸缓冲液(PH=7.8)定容至100ml; (3)750μM四氮唑蓝(NBT):取0.06133gNBT用磷酸缓冲液(PH=7.8)定容至100ml(避光保存); (4)100μM EDTA-Na2:取0.0372g EDTA-Na2用磷酸缓冲液(PH=7.8)定容至1000ml; (5)20μM FD (核黄素):0.00753gFD用磷酸缓冲液(PH=7.8)定容至1000ml(现配现用)。 1.3 SOD反应液: 磷酸缓冲液(PH=7.8):Met:NBT:EDTA-Na2:核黄素(FD):H2O的比例为15:3:3:3:3:2.5,按母液顺序配制。 二、主要仪器万分之一分析天平、紫外分光光度计、医用离心机、研钵三、试样的制备取新鲜样本剪碎充分混匀后,装入样本瓶放入4℃冷藏备用。四、分析步骤4.1 酶液的制备: 称取鲜样0.5g放入研钵中,加5毫升PH=7.8的磷酸缓冲液,冰浴研磨,匀浆倒入离心管中,冷冻离心20分钟(10000×g),上清液(酶液)倒入试管中,置于0~4℃下保存待用。 4.2 SOD的测定 取型号相同的试管,吸取20ul的酶液,加入3ml反应液,4000Lux照光(多用为环形日光灯的光照培养箱)30分钟(尽量做到照光情况一致)4.3 空白与对照的制备同时取四支试管,三支做对照(CK),一支做空白(不加酶液,以缓冲液代替);空白置暗处,对照(CK)与酶液同至于4000Lux条件下照光3...
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发布时间: 2021 - 12 - 31
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速效钾是土壤中可被植物吸收利用的组分,具有促进植物淀粉和糖分合成、增加油脂和蛋白质含量、增强作物抗逆性等重要作用。今天栢晖小编整理了如何通过醋酸铵—火焰光度计法来测定土壤中的速效钾~一、试剂(1)中性1.0mol/L NH4OAc溶液:称77.09 g NH4OAc溶于近1升水中,用稀HOAc或NH4OH调节至pH7.0,用水定容至1升。(2)K标准溶液:称取0.1907 g KCLmol/L NH4OAc溶液中,完全溶解后用1mol/L NH4OAc溶液定容至1升,即为含100 mg/L K的NH4OAc溶液。用时分别吸取此100mg/L K标准液0,2,5,10,20,40 ml放入100 ml容量瓶中,用1mol/L NH4OAc定容,即得0,2,5,10,20,40 mg/L K标准系列溶液。二、主要仪器1/1000天平、振荡机、火焰光度计、三角瓶(250ml,100ml)、漏斗(60ml)、滤纸、坐标纸、角匙、吸耳球、移液管(50ml)三、试样的制备取风干的实验室待测样品充分混匀后,取待测样品充分混匀后,按四分法缩减至 100g,粉碎,然后全部通过18目孔径筛,装入样品袋备用。四、分析步骤称取风干土样(1mm孔径)5.00 g于150ml三角瓶中,加1mol/L NH4OAc溶液50.0ml(土液比为1:10),用橡皮塞塞紧,在20—25℃下振荡30分钟用干滤纸过滤,滤液与钾标准系列溶液一起在火焰光度计上进行测定,在方格纸上绘制成曲线,根据待测液的读数值查出相对应的mg/L数,并计算出土壤中速效钾的含量。五、结果计算式中:C—待测液浓度mg/L;m—风干土重;V—加入浸提剂毫升数;
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发布时间: 2021 - 12 - 27
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之前,栢晖生物给大家整理分享过粗脂肪、粗灰分等指标的测定方法,今天咱们来看看如何通过残重法测定植物中的粗纤维。试验流程如下:一、试剂所有试剂除注明者外,均为分析纯。1.1 1.25%硫酸:取相对密度1.84的浓硫酸13.0ml 加水稀释至1L。1.2 1.25%氢氧化钾溶液二、主要仪器万分之一分析天平、电热板、锥形瓶三、试样的制备取风干的实验室待测样品充分混匀后,按四分法缩减至 100g,粉碎,籽粒全部通过20目筛,装入样品瓶备用。四、分析步骤4.1 称取干燥样品1-3.0g,移入500ml锥形瓶中,加入200ml煮沸的1.25%硫酸,加热使其微沸,保持体积恒定,维持30min,期间每隔5min摇动锥形瓶一次,充分混合瓶内物质。4.2 去下锥形瓶后用带有已知质量滤纸的漏斗过滤,并用热蒸馏水冲洗锥形瓶及漏斗,直至滤液用石蕊试纸测定为中性反应为止。4.3 再用200ml煮沸的1.25%氢氧化钾溶液将滤纸上的沉淀物完全洗入原锥形瓶内,将其加热至沸腾再继续30min,操作同4.1。4.4 煮沸后冷却,用原来所用已知质量的滤纸,用蒸馏水冲洗2~3次,再用乙醇和乙醚各洗涤一次。4.5 将滤纸和沉淀在100~105℃的烘箱中烘至恒重并称重。 五、结果计算粗纤维含量(%)=(M1/M2)×100%式中:M1--为烘干后残余物的质量,g;M2--为试样的质量,;100--换算因数。来源:栢晖生物整理。
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