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2022
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今天，我们通过5个食品样本的分析案例给大家分享一下如何通过高效液相色谱法对17种水解氨基酸进行测定：一、实验方法及原理试样经酸水解得各种氨基酸后,经高效液相色谱在线衍生检测分析外标法定量测定氨基酸酸的含量。二、实验步骤2.1主要实验仪器 HPLC（紫外检测器，在线衍生）离心机（12000rpm）天平（0.01g，0.1mg）超声波清洗机（240w）干式氮吹仪（100℃）烘箱（105℃，115℃）2.2 实验步骤1、 水解：准确称取一定量试样（精确至0.0001g），使试样中蛋白质含量在10mg~20mg范围内。将称量好的样品置于水解管中。根据试样的蛋白质含量，在水解管内加10mL~15mL6M盐酸溶液。用氮气置换管内空气后密封。2、 水解管在115±5℃烘箱中水解22~24h后放至室温，取出水解液，用0.22μm孔径的滤膜过滤，取1ml续滤液至进样小瓶中，100℃氮吹干后用0.1M的HCL水溶液超声溶解固体物质，取溶液直接进样。（根据实际浓度可以用0.1M的HCL水溶液适当稀释，一般植物均可用1mL 0.1M HCL水溶液稀释）3、 标准溶液配制：购买市售标准溶液（10pmol/μL、25pmol/μL、100pmol/μL、250pmol/μL、1000pmol/μL）。2.3 色谱条件参数值色谱柱AdvanceBio AAA C18，4.6 × 100 mm, 2.7 µm流速1.5 mL/min柱温40 °C流动相A) 10 mmol/L 磷酸氢二钠和 10 mM硼酸钠溶液，用盐酸将 pH 调节为 8.2B) 甲醇:乙腈:水，45:45:10 (v:v:v)梯度程序时间 (min) %B0.0 20.35 215.7 10015.8 218.0 2检测器338 nm，带宽 10 nm；参比 390 nm，带宽 20 nm（一级氨基酸）262 nm，带宽 16 nm；参比 324 nm，带宽 8 nm（二级氨基酸）进样程序• 吸取 2.5 μL 硼酸盐缓冲液（1号瓶）• 吸取 1.0 μL 样品• 在清洗口将3.5 μL 混合液混合 5 次• 等待 0.2 分钟，然后吸取 0.5 μL OPA（2号瓶）• 在清洗口将 4 μL 混合液混合 10 次• 吸取 0.4 μL FMOC（3号瓶）• 在清洗口将 4.4 μL 混合液混合 10 次• 吸取 32 μL 稀释剂（4号瓶，此步骤一般情况不使用）• 在清洗口将 20 μL 混合液混合 8 次• 进样• 等待 0.1 分钟• 阀切换至旁路2.4 测定方法依据保留...